预制胶——轻松应对蛋白电泳

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所属分类:蛋白质组学
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现在,聚丙烯酰胺 凝胶电泳 (PAGE)已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验,它比核酸电泳可复杂多了,需要准备的试剂多,耗时也长,而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片,却花了好几天时间,横 竖还是不满意。这时,你就可以考虑一下预制胶了。

蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽 兼容的Precise Protein Gel预制胶。Precise Protein Gel是pH值中性的,蛋白不易降解,完整性好,而凝胶也稳定易保存,保质期可达12个月以上。同时,配合Tris-HEPES-SDS缓冲液,分辨率更高,且电泳速度更快,只需45分钟就可以完成电泳。最重要的是,Precise Protein Gel可以与多种电泳槽 相兼容,包括实验室中最普遍的Bio- Rad Mini-PROTEAN 3、Invitrogen 的Novex XCell II Surelock?和Hoefer等电泳槽,这样你就不用为了几盒胶而特地去买一个槽了,而且说明 书也很贴心,针对不同的电泳槽都有详细的步骤和图示。

目前有两种梯度浓度(8-16%、4-20%)和三种固定浓度(8%、10%、12%)可供选择,规格是最常用的10孔、12孔和15 孔。10孔的上样量达50ul,几乎是其他预制胶的两倍。蛋白分离 范围请看下表,大部分蛋白都可以得到很好分离,但是如果蛋白特别大或特别小,估计就不适用了。目录价是1526元(10块),有点小贵,不过6月10日前有促销,买一送一,相当于每块76.3元。

浓度 8% 10% 12% 8-16% 4-20% 分离范围(kDa) 205-45 205-24 205-14 205-14 205-6.5

Invitrogen早在2005年就开始大力推广NuPAGE预制胶,虽说当时的价格确实比较高,但也有不少用 户在试用了之后,觉得效果好又方便,还是忍痛买了。现在胶的价格降了2/3,也算是一个福音吧。NuPAGE胶专利的中性pH 和缓冲系统使凝胶 非常稳定(12个月的保质期),而且配合NuPAGE Antioxidant一起使用,使蛋白不易降解和氧化,提供了最佳的条带分辨率,减少了蛋白的修饰,改善了Western blot 的分析结果;电泳时间只需要35分钟,非常省时。很多用户使用后反映条带确实很sharp,比自己配胶可强多了。

NuPAGE胶分为两种:NuPAGE Bis-Tris Gel(适合中等大小或小蛋白,2.5-200 kDa)和NuPAGE Tris-Acetate Gel(尤其适用于大蛋白,30-400 kDa)。目前有五种浓度(10%、12%、4-12%、7%、3-8%)、两种厚度(1.0mm和1.5mm)以及不同孔数可供选择,总有一款合你心水。现在的促销价是每盒(10块)576元,比较实惠,不过就是与其他电泳槽不兼容,还要再花1980元买一个Novex XCell II Surelock?电泳槽。相关的缓冲液都有配方提供,可以选择自己配,除了NuPage Antioxidant,不过如果你的蛋白不易被氧化的话,也可以选择不加。

说起跑胶,怎么能忘了Bio-Rad呢?在实验室里放眼望去,几乎全是Bio-Rad的电泳槽。不过大部分用户都是自己配胶 ,可能还不知道Bio-Rad也有预制胶。Bio-Rad有多种规格、浓度和成分的预制胶,配合不同的电泳系统。平时实验室里最常用的是Mini- PROTEAN 3电泳槽,所以这里就介绍与之配套的Ready Gel预制胶。用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的Ready Gel有两种:Tris-HCl Gel和Tris-Tricine Gel,Tris-HCl Gel主要用于SDS-PAGE 和非变性的Native PAGE;Tris-Tricine Gel则用于分离肽段。

因为是碱性环境(pH 8.8),胶易降解,所以只能保存12周(除去订货和路上的时间,到手估计只有4周了)。有多种浓度和孔数供选择,蛋白分离范围请看下表。Ready Gel可以分离小至1 kDa的蛋白,不过对于250 kDa以上的蛋白,就无能为力了。它是一块一块单独售卖的,每块的价格在130左右,偏贵,不过偶尔买一块来跑个漂亮的电泳图,用来发paper,还是可以接受的。

Tris-HCl Gel 分离范围 (kDa) Tris-HCl Gradient Gels 分离范围 (kDa) Tris-Tricine Gel 分离范围 (kDa) 5% 100-250 4-15% 20-250 16.5% 4-30 7.5% 40-200 4-20% 10-200 10-20% 1-40 10% 30-150 8-16% 6-70     12% 20-120 10-20% 10-100     15% 10-100         18% 6-50        

综上,我们将三家公司的预制胶做了一个比较。大家可以根据目的蛋白的大小、实验室的配置来选择合适的预制胶。预制胶因为是大规模生产的,所以胶与胶之间重复性好,不像手工灌胶那样结果差异大。且即开即用,不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固,节省了宝贵的时间。另外,现在的中性凝胶保质期长,分辨率高,这些都成为我们改用预制胶的理由。但是,价格却限制了它的大规模使用。如果有的实验室只是偶尔跑几次胶,或是进行重要的实验,还是不妨一试吧,毕竟,它能让你从繁重的实验和不确定的结果中解放出来。

品牌 性能 蛋白分离范围 (kDa) 电泳时间 兼容性 保质期 价格/块 PIERCE pH值中性,蛋白不易降解 6.5-205 45min 好 12个月 76.3 Invitrogen pH值中性,蛋白不易降解和氧化,提供了最佳的条带分 辨率 2.5-400 35min 不好 12个月 57.6 Bio-Rad pH值碱性 1-250 35-100min 不好 3个月 130
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