凝胶选择指导

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所属分类:蛋白质组学

 

Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶,包括不同的成分,百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度,缓冲系统,上样孔格式以及胶的厚度,对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。 E-PAGE™ 96 High-Throughput System 是整合的、无缓冲液系统,设计用来检测和分析大量的蛋白样品,时间仅仅需要14分钟。 NuPAGE® Novex Gels 组合了完美的技术和极度的可靠性。货架期长达12个月,比其它蛋白凝胶需要的电泳时间更短,中性pH值,为大多数蛋白的分离和转移提供优良的性能。现在可以获得8个分离范围,分离绝大多数不同大小的蛋白。 Novex® Tris-Glycine Gels 基于传统的Laemmli buffer system,可能被使用在所有鞍椎姆掷搿Mü�nvitrogen公司可以获得12种不同百分比浓度和加样孔大小的凝胶。 Novex® Tricine Gels 是分离肽和低分子量蛋白的理想凝胶。 Novex® Zymogram Gels 使用gelatin或者casein作为底物分离活性蛋白酶,可以鉴定蛋白酶的大小和活性。 预制聚丙烯酰胺凝胶一般信息: 基质: 聚丙烯酰胺
厚度: 1.0mm或者1.5mm
大小: 8cm(h)x8cm(w)
cassette 大小: 10cm(h)x 10cm(w)
加样孔格式:17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔
堆积胶:大多数Novex® gels为4%堆积胶
* Novex®预制胶适用于XCell SureLock™ Mini-cell和大部分其它设计为10cm(h)×10cm(w)gel cassette的mini-cells。E-PAGETM预制胶适用于E-Gel® Base,E-Gel® PowerBaseTMv.4或者E-Base™单元。 选择合适的凝胶百分比浓度 一般而言,分离分子的大小应该决定你选择丙烯酰胺的浓度。使用低百分比浓度凝胶分离较大的分子,高百分比浓度的凝胶分离较小的分子。进行等电聚焦时,这条规则例外。参看凝胶迁移图发现最适合你应用的凝胶。通常,为了达到最佳的分辨率,分子应该移动通过凝胶长度的70%。当蛋白分子量范围宽或者未知,梯度胶通常是最好的选择。 选择加样孔格式和凝胶厚度 我们提供大部分聚丙烯酰胺凝胶为9孔的格式(17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔)。一些类型的凝胶可以得到两种厚度(1.0mm和1.5mm)。如果上样量大(>30μl)时,使用较厚的凝胶(1.5mm)和较少的上样孔(5孔)更为合适。如果blotting,记住蛋白从1.0mm的凝胶中比从1.5mm的厚胶中更容易转移。表1总结了各种类型凝胶的特定和应用。使用表2确定哪一种上样孔格式最适合容纳你的样品量。 表1 选择使用胶的类型

  胶的类型 胶浓度 分离范围 货架期 平均电泳时间 应 用 蛋白质分析 E-PAGE™ 96 6% 10-200 kDa 1年 14分钟 高通量、变性蛋白的分离,以进行重组生产分析和蛋白谱研究,可以电泳后染色和western blots NuPAGE® Bis-tris 10%,12%,4-12% 1.5-300 kDa 1年 35-50分钟 pH中性,12个月货架期凝胶。对于变性和还原蛋白具有优良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳选择。 NuPAGE® Bis-Acetate 7%,3-8% 30-400 kDa 8个月 60分钟 8个月货架期的高性能凝胶。对于较大的蛋白效果极佳。也能够用来做非变性电泳(native)。 Tris-Glycine 4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20% 6-500 kDa 1-2月 90分钟 准确和可重复的分离非变性(native)和变性蛋白。可以得到各种范围的Laemmli-style 凝胶。 Tricine 10%,16%,10-20% 2-200 kDa 1-2月 90分钟 小肽的分离 IEF pH3-7,pH3-10 pI3.0-pI8.5 5月 150分钟 根据等电点分离可溶性蛋白。 Zymogram 10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein) 30-200 kDa 2个月 90分钟 利用casein 和gelatin作为底物,确定特别活性蛋白酶。 表2 获得最佳结果的推荐上样量

聚丙烯酰胺凝胶 1孔 IPG孔 2D孔 5孔 9孔 10孔 12孔 15孔 17孔                     最大上样量/孔 1.0 mm厚度 700 µl 7 cm IPG条 400 µl 60 µl 28 µl 25 µl 20 µl 15 µl 15 µl 1.5 mm厚度 n/a n/a 600 µl n/a n/a 37 µl n/a 25 µl n/a 推荐获得最佳分辨率的最大上样量* 每条蛋白带,考马斯亮兰染色 12 µg n/a 12 µg 2 µg 0.5 µg 0.5 µg 0.5 µg 0.5 µg 0.5 µg 注释:E-Gel® 要求20μl样品量/孔 。
*NuPAGE®胶比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上样能力。
 

 

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