DNA电泳带型原因分析及解决办法

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所属分类:蛋白质组学
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DNA跑完电泳后,需要进行带型分析,电泳图上的带型可能有出现许多状况。那么如何根据DNA电泳带型结果调整自己的实验呢?这里简单的做个介绍。

DNA电泳带型原因分析及解决办法

DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高DNA降解避免DNA。

带型 原因分析 解决办法 弱带或无带 上样的DNA量不够 增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳 比琼脂糖电泳灵敏度稍高 DNA降解 避免DNA的核酸酶污染 电泳时间过长,DNA跑出 减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度 EB染色的DNA,紫外光源不合适 应用短波长(254 nm),增强紫外灯灵敏度 DNA带缺失 小DNA带走出凝胶 减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度 分子 大小相近的DNA带不易分辨 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度 DNA 变性 电泳前请勿高温加热DNA链,以20 mM NaCl Buffer稀释DNA 巨大DNA链,凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析 DNA带模糊 DNA降解 避免核酸酶污染 DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20 V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 DNA样含盐过高 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白 DNA变性 电泳前勿加热,用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA 不规则DNA带迁移 对于λ/Hind III片段COS位点复性 电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟 电泳条件不合适 电泳电压不超过20 V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力 DNA变性 以20 mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳

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