凝胶电泳操作的小技巧

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所属分类:蛋白质组学

最近在做核酸电泳,感觉自己做的差的要死,羞于见人……

无奈之下上上网,到处找找资料咯。话说现在做实验似乎已经变成生活的一部分了,不然我怎么感觉这些实验资料每个看起来都这么像人人、豆瓣上分享的生活小贴士……

1、让凝胶电泳变得更快,更漂亮

方法改进:将电泳电压进行定时变化,例如可以在开始时将电泳电压调节至 100V,大约 15min。

使条带的确可以因为自身片段大小不同而产生较大差别的泳动速度,从而将片段分离,然而现在的分离或许会间距较小,从而图片很不漂亮,或者不易观察.可以紧接着进行 120V-130V 的电压进行较小差 异电泳,但是由于电泳电压较大,可以避免过大的片段残存在胶孔不易泳动的情况.

结果:这样两个电压进行配合电泳,便可以得到非常漂亮的电泳条带,并且可以节省 1/5-2/5 左右 的时间.

2、RNA 电泳如何得出漂亮的条带

方法改进:1.电泳槽,制胶器,梳子等的清洗:去污剂浸泡过夜——>自来水冲洗干净——>ddH20 冲洗——>3%H2O2 灌满浸泡过夜——>灭活的 0.1%DEPC水冲洗干净——>超净台内紫外线照射过夜. 2.烧瓶,烧杯,药匙,量筒等制胶器械的清洗:0.1%DEPC 水浸泡过夜后高压消毒灭活,烘箱烘干.

或 者 ddH20 清洗干净, 超净台内紫外线照射过夜. 3.电泳缓冲液必须是 RNase free(最好买试剂公司的,这里推荐生兴的,应为我师兄在生兴做,做点小广告) . 4.预电泳 5-10min 减少了非特异 RNA 条带的出现,有利于分离和纯化,同时可根据电泳仪是否冒泡判断电 泳仪装置是否有误.

5.样品是在电泳缓冲液液略低于胶表面而不是在高过胶面时加进齿槽,避免了加样 时 RNA 的扩散,加样后 RNA 从齿槽逸出造成 RNA 的弥散及定位不良等现象. 6.电泳 3-5min 让 RNA 进入凝胶后再加电泳缓冲液液高过表面,确保了加到每个槽中的 RNA 量及定位的准确性,从而有利于 DNA 的鉴定和纯化.

3、如何提高 SDS-PAGE 的分辨率

方法改进:借鉴 Tricine-SDS-PAGE 中添加甘油或者尿素来提高分辨率的成功经验,在普通的 SDS-PAGE 中加入约 13%的甘油,同样可以提高分辨率,有效防止小分子量蛋白的弥散.只要把原来 配方中的水换成 60%的甘油,就可以了.

结果:加入甘油之后,条带较细,分得更开.

4、改进一点点,我们能得到更加美观的 SDS-PAGE 胶

方法改进:所做的改进很简单却很有效,加完分离胶后,用移液枪吸取酒精(浓度没有特别要求, 干净无污染就好)加到分离胶上至覆盖界面,静置片刻后放到 37℃恒温箱中可加速胶的凝固.待到分 离胶完全凝固之后倒去上层的酒精,就可以看到齐平漂亮的界面啦!

改进二:脱色 背景:给染色结束的 SDS-PAGE 胶脱色往往需要比较长的时间,否则会由于脱色不完全而导致条 带不清晰,影响到拍照的效果.

方法改进:改进的方法很简单易行——取一张我们常常随身携带的面巾纸,打个结放入盛有脱色液 的大培养皿里放到脱色摇床上,这样一来,原来过夜脱色达到的效果现在只需要短短的 3,4 个小时就 可以轻松实现了. PS:希望大家这个时候用的面巾纸是质量比较好不容易掉屑的...
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以上也是我从别的论坛搞到的,附件是一个PDF,主要是ebiotrade()的一个核酸电泳专题整理的资料。这些改进主要是一些大学实验室里的师兄师姐们分享的个人经验,我可没一个个都验证过……大家觉得有用参考一下,不对的话千万不要拍我……凝胶电泳操作的小技巧

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