羧肽酶的制备及其性质

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所属分类:蛋白质测序

【目的要求】
1. 实验目的
⑴ 通过学习生化及相关学科的理论和技术,熟悉并进一步掌握酶的提取、分离、纯化、检测及其生物学性质和理化性质的实验技能。
⑵ 初步培养从总体水平进行实验的设计,进一步加强并提高综合分析解决问题的能力。
⑶ 培养科研工作中的协作精神和勤俭而高效的科研作风。
2. 实验要求
⑴ 本实验由面包酵母为初始材料,制备高纯度羧肽酶Y,对羧肽酶Y生化性质的检测。
⑵ 通过相关文献资料的收集、分析、设计本实验的可行报告。
⑶ 可行性报告包括实验目的、意义、国内外进展、实验方法和技术路线及可行性分析、实验预期结果。
⑷ 在本实验开始前一个月,将实验报告草案提交指导教师,以审核和准备实验材料等。
⑸ 实验报告草案应提供最少十篇文献,其中至少有两篇是近五年内的文献,包括新技术、新方法在生物大分子研究中的应用。
(6) 文献按学术期刊论文的格式要求,即作者、文章名、刊名、年、卷(期)、页码,参考书籍类同。
⑺ 本实验基本两人一组,在部分实验中需几组合作进行。
⑻ 实验报告包括:采用实验的原理;实验所需试剂、仪器、设备;提取、分离、纯化的每步骤的蛋白回收率、活性回收率,最终产率;按实验内容,提供实验结果及相关图表;完成实验后从整体上进行相关的讨论。
【实验内容】
1 .羧肽酶Y活性检测
⑴ 酶活力测定方法
⑵ 酶活力单位定义
⑶ 比活力定义
⑷ 蛋白含量测定方法
2. 面包酵母羧肽酶Y的提取
⑴ 每组500克新鲜面包酵母
⑵ 利用溶解度等原理进行羧肽酶Y提取
⑶ 羧肽酶Y的活化
3. 羧肽酶Y的分离、纯化
⑴ 利用各种方法,从上述提取液分离羧肽酶Y
⑵ 每步纯化前蛋白纯度检测
⑶ 分离纯化过程中跟踪检测活性组份蛋白质含量和酶活性
4. 羧肽酶Y理化性质 
⑴ 采用两种方法验证羧肽酶Y纯度
⑵ 羧肽酶Y的分子量测定
⑶ 羧肽酶Y的等电点测定
5. 羧肽酶Y的酶学性质
⑴ 在活力单位定义确定后,求出羧肽酶Y的Vmax和Km
⑵ 初步确定羧肽酶Y的最适pH
⑶ 初步确定羧肽酶Y的最适温度   
⑷ 提出最少两种羧肽酶Y的可逆抑制剂并验证抑制类型
⑸ 提出羧肽酶Y的激活性并验证  
(6) 羧肽酶Y的热稳定性

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