蛋白质的化学复习笔记

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所属分类:蛋白质测序

摘自张迺衡编著的<生物化学>(北京医科大学,第二版)
  1.  用紫外吸收法测定溶液中蛋白质含量时,波长是多少?用此波长的依据是什么?   色氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸在280nm附近有最大吸收,多数蛋白含有这tyr, trp残基。所以在紫外分光中用280nm对它们进行检测。
  2.  氨基酸有哪些成色反应?哪些是肽,蛋白质共有的?各有什么用途?   氨基酸的成色反应有茚三酮反应,丹磺酰氯,FDNB成色反应。 蛋白质的成色反应有:双缩脲反应,。其中,FDNB又叫sanger试剂, 可以与氨基酸的α-NH2形成又颜色的衍生物,并可在蛋白质水溶液中保持稳定。这几种试剂币茚三酮更具有优点。AA的R基团可保留于产物中,各种AA的R基团的不同可以用来检测蛋白质中各种氨基酸(蛋白质定性,定量分析)。 此外,含有酪氨酸,色氨酸,精氨酸,组氨酸 这四种AA的肽也有相同的反应。 酪氨酸: millon反应, 酚试剂反应, 黄色蛋白反应; 色氨酸: 乙醛酸反应, ehrlich蛋白反应; 精氨酸: 坂口反应; 组氨酸: poly反应。
3.  什么是蛋白质的一级,二级,三级,四级结构?他们分别依靠什么样的键合力建立起这样的结构? 一级结构(肽键):各种氨基酸在多肽链上按一定顺序的排列成为~ 二级结构(氢键):多肽链骨架中原子的局部空间排列,不涉及侧链的构像,有α螺旋,β折叠和β转角。 三级结构(次级键):具有二级结构,超二级结构或域结构的一条多肽链,由于其序列上相隔较远的氨基酸残基侧链的相互作用,而进行范围广泛的盘曲与折叠,形成包括主,侧链在内的空间排列,这种在一条多肽链中所有原子在三维空间的整体排布称为~ 四级结构(次级键):许多有生物活性的蛋白质由两条或多条肽链构成,肽链与肽链之间并不是通过共价键维系,每条肽链都有自己的一级,二级,三级结构,这种蛋白质的每条肽链叫做亚基。由亚基构成的蛋白成为寡聚蛋白,寡聚蛋白中亚基的立体排布, 亚基之间的相互关系成为蛋白质的四级结构。
4.  有哪些方法可以测定蛋白质的一级结构?  化学法: 蛋白质的一级结构分析一般先作氨基酸组成分析,再作N末端和C末端鉴定; 将链间,链内的二硫键拆开; 再选择适当的酶或化学试剂将多肽部分水解,使肽段大小适合于Edman降解法的应用;每一小肽段的序列分析完成后,用肽段重叠法将完整的多肽链顺序确定; 最后,可用电泳法确定二硫键的位置。 另外,DNA序列推断蛋白质序列由快速的优点,可与化学法和一级结构分析同时使用,互相取长补短。

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