微量凯氏(kjeldahl)定氮法测蛋白质含量

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所属分类:蛋白质测序

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

若以甘氨酸为例,其反应式如下:

nH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+nH3 (1)

2nH3+H2SO4——(nH4)2SO4 (2)

(nH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2nH3 (3)

反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量,如欲求得样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。

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