动物组织核糖核酸的制备及测定

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所属分类:蛋白质测序

目的和要求

1 学习和掌握用苯酚法及 盐溶液 法从动物组织提取核酸的原理及操作技术。
2 练习从动物组织提取RNA,并鉴定纯度。

实验原理

利用苯酚法可以直接从动物组织中提取RNA,组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水层中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后RNA即呈白色絮状沉淀析出。

操作步骤

1 称取3克肝组织,剪成小块,置于研钵中,加3-4滴90%的苯酚溶液后研磨,匀浆中加入15mL水,转移至三角烧瓶中,加10mL酚至三角烧瓶中。

2 室温下剧烈振荡45分钟,于3000rpm离心20分钟。

3 用吸管将上层液吸出,并加入1/2体积的氯仿-异戊醇,于低温下振荡20分钟,以除去提取液中的蛋白质,以2000rpm离心10分钟,吸出上层清液,向上清液中加入醋酸钾粉末,使最后浓度大约为2%,装入小 烧杯 后,一边搅拌,一边缓慢加入两倍于上清液体积的95%乙醇以沉淀RNA。

4 于冰浴中放置半小时后,以1000rpm离心5分钟,沉淀再用少量75%乙醇洗涤1-2次,收集沉淀,置于干燥器内干燥,称重。

5 测定A260/A280的值,应大于1.85,若小于1.85,则说明含杂蛋白和DNA高了。

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