紫外分光光度法测定蛋白质含量

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所属分类:蛋白质测序

摘要:
考马斯亮兰G250与蛋白质结合,在0-1000ug/ml范围内,于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速,结合产物在室温下10分钟内较为稳定,是一种较好的蛋白质定量测定方法。

1. 实验部分

1.1 仪器 与 试剂 :

Labtech UV POWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;
牛血清蛋白;超纯水。

1.2 试液的制备:

牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超纯水溶解并定容。
考马斯亮兰G250 试剂 称取100mg考马斯亮兰G250,溶于50ml95%的乙醇后,加入120ml85%的磷酸,用水稀释至1升。

2. 结果与讨论

2.1 校正曲线的绘制

准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml 试管 中,然后用超纯水补充到0.1ml,各 试管 分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂,混合均匀后,即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图,校正曲线方程为A=0.613556C+0.001008,R=0.9994。

紫外分光光度法测定蛋白质含量

2.2 精密度

配制0.6mg/ml牛 血清 蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次,得到吸光度的相对标准偏差。

表1 精密度测定结果
紫外分光光度法测定蛋白质含量

2.3 稳定性

取1mg/ml牛 血清 蛋白标准溶液每十分钟测定一次,50分钟内的吸光度变化如下表2。

表2 稳定度测定结果
紫外分光光度法测定蛋白质含量

3. 结论

该方法测定快速、简便,干扰物少,是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定紫外分光光度法

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