iTRAQ蛋白质定量与生物标志物发现技术平台

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所属分类:蛋白质测序

定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科。目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳(DIGE)、同位素亲和标记(ICAT)等。同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术。结合非凝胶串联质谱技术,该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性,并可对多达8种不同样本同时进行定量分析。

蛋白质组学 定量 质谱技术

蛋白质组学的研究非常复杂,仅仅知道蛋白质的身份并不足以最终确定蛋白质,因为蛋白质的浓度对于实现其在细胞中的功能来说极其重要,一种特殊蛋白质在浓度上的变化,就能预示细胞的突变过程。因此,科学家能够对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量,是很重要的事情。过去,科学家通常先进行二维(2D)凝胶电泳,切断条带,再用质谱方法测量条带中的蛋白质。而采用iTRAQ蛋白质定量技术可以加速蛋白质的定量研究,基于高度灵敏性和准确性的串联质谱方法,不需要凝胶,就可以获得蛋白质相对和绝对的结果。iTRAQ试剂盒包括8种同量的氨基反应试剂,能对蛋白质水解的肽段标记,因此采用串联质谱方法,可以对肽段进行准确的鉴定和定量。iTRAQ的操作程序非常简单,既可以直接标记蛋白质,也可以将蛋白质酶解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。再将标记物混合,这样就可以对其进行比较。与样本结合后,用2D液相色谱串联质谱进行分析。在质谱分析鉴定特殊肽离子片段结构的基础上采用Protein Pilot软件包对每一个肽段进行鉴定。

技术路线图:

蛋白质组学 定量 质谱技术

蛋白质组学 定量 质谱技术

iTRAQ定量实验,操作简便没有更多烦琐的额外操作步骤,相对于一般的蛋白质组分析流程,iTRAQ定量只增加了简单的一步,iTRAQ标记,反应效率高、时间短,不会增加工作量。只要掌握了一般的蛋白质组学分析技术,就能完成iTRAQ定量实验。

主要特点:

1、一次实验同时定量4或8个样品,极大提高了通量。

2、技术路线简单,不需要额外的烦琐操作。

3、能够增强二级碎片离子信号,能产生更好的y离子和b离子系列,二级谱图质量更好。

4、标记所有的肽段,提高了蛋白质组的覆盖率,包括翻译后修饰,而且提高了鉴定和定量的可信度。

由于iTRAQ定量实验具有操作简单、重复性好、定量效果好等特点,所以得到大家的认同和喜爱,并且逐渐成为蛋白质组学定量研究技术的主流。

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