蛋白质的性质实验:蛋白质等电点的测定和沉淀反应

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所属分类:蛋白质测序

一、蛋白质等电点的测定

1、目的

(1)了解蛋白质的两性解离性质。

(2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。

2、原理

蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱 度影响。当溶液的pH 达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等, 在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH 值称 为此种蛋白质的等电点。

不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时,蛋 白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电 点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH 值。

本实验借观察在不同pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋 酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH 值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白 的等电点。

3、器材

(1)水浴锅(2)温度计(3)200mL 锥形瓶

(4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)试管

(7)试管架(8)乳钵

4、试剂

(1)0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200mL

取0.4g 酪蛋白,加少量水在乳钵中仔细地研磨,将所得的蛋白质悬胶 液移入200 mL 锥形瓶内,用少量40~50℃的温水先洗涤乳钵,将洗涤液也 移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L 醋酸钠溶液。把锥形瓶放入到50℃水浴中, 并小心地旋转锥形瓶,直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移 至100mL 容量瓶内,加水至刻度,塞紧玻塞,混匀。

(2) 1.00mol/L 醋酸溶液100mL

(3)0.10mol/L 醋酸溶液100mL

(4)0.01mol/L 醋酸溶液50mL

5、操作

(1)取同样规格的试管4 支,按下表顺序分别精确地加入各试剂,然后混匀①。

蛋白质的性质实验:蛋白质等电点的测定和沉淀反应

(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,加一管,摇匀一管。此时1、 2、3、4 管的pH 依次为5.9、5.3、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10 分 钟后,再观察其混浊度。最混浊的一管的pH 即为酪蛋白的等电点。

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