案例展示—客户发表文献

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所属分类:文献分享

MAPK磷酸化作用介导植物花青素合成

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Plant Cell. 2016 Nov; 28(11): 2866-2883. IF=8.6879 ,单位:中国科学院微生物研究所

研究背景:

MAPK作为蛋白激酶能够通过磷酸化不同的下游底物蛋白来激发特异的基因表达和细胞反应,从而启动植物在感知外界信号后启动特异的细胞反应。作为最主要的环境信号之一,光影响植物的多个生理和代谢过程,但是由于蛋白磷酸化的瞬时性给MAPK底物的鉴定造成了一定的困难,我们对光调节下游反应的信号转导机理仍然所知甚少。

研究结果速度:

本研究利用组成型激活形式的MPK4为诱饵,筛选拟南芥文库获得了其互作蛋白MYB75。MYB75是一种R2R3类转录因子,调控花青素的积累。研究发现,MPK4与MYB75在体内相互作用,且这种互作依赖于MPK4的激酶活性。MPK4参与了光诱导的花青素积累,与MPK4互作是MYB75调控花青素合成的功能所必需的。进一步研究发现,MPK4可被光信号激活。体外磷酸化反应证明激活的MPK4能够磷酸化MYB75,体外磷酸化反应产物通过TiO2富集磷酸肽段并进行LC/MS质谱分析鉴定磷酸化位点发现磷酸化主要发生在Thr126位点。磷酸化使MYB75蛋白的稳定性增加,从而显著促进花青素的合成。有趣的是,这种MYB75蛋白稳定性的增加并不依赖于E3泛素连接酶COP1。研究结果揭示了MPK4介导的MYB75磷酸化是光诱导的花青素积累所必需的。


服务内容:

TiO2富集磷酸化肽段,LC/MS磷酸化位点分析

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(图1)MPK4与MYB75在体内相互作用

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(图2)体外磷酸化反应与质谱鉴定磷酸化位点



微管且除

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The EMBO  journal. 2017 oct.DOI:10.15252. IF=9.7 ,单位:中国科学院微生物研究所,中国科学院大学

研究背景:

微管作为一种高度动态的细胞骨架,在细胞周期运行、细胞分裂、细胞形态维持、细胞迁移等方面起至关重要的作用,但微管功能的行使需要进行切割,Katanin作为一类可以切割微管的微管相关蛋白,保守存在于动物和植物之间。由两个亚基成,P60/KTN1和P80/KTN80。但活细胞中研究Katanin复合体对微管切割的调控机制尚未取得良好进展,且Katanin亚基p60/p80复合体的具体组成及结构也不十分清楚。


研究结果速读

本研究通过构建了CRISPR/Cas9基因敲除载体并指导了后代转化子的筛选鉴定,发现Katanin亚基缺失带来拟南芥生长发育异常,这种发育异常是由微管的排列方式发生紊乱,微管切割能力缺陷所导致的。通过双分子荧光互补以及体外IP相互作用产物质谱鉴定证明拟南芥中p80亚基KTN80和p60亚基KTN1呈异源二聚体形式存在于细胞质中,当发生微管切割作用时KTN80具有制导作用,可将KTN1-KTN80异源二聚体导向至微管切割位点,而p60亚基KTN1介导KTN1-KTN80异源二聚体的六聚体化,最终形成十二聚体的环状超复合体,并识别特异的微管构象、完成切割,p60亚基执行切割功能。该研究首次在活细胞水平揭示了微管的精准切割机制,也为操控微管切割提供了新的思路及药物设计新靶标。

服务内容

LC/MS混合蛋白样品鉴定

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(图3)katanin超复合体中katanin蛋白质之间的相互作用。


3.何首乌肝毒性研究


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The journal of Cellular Physiology and Biochemistry.;October 24, 2017. IF=5.1,单位:中国中医科学院,北京中医药大学

研究背景

何首乌作为有名中药有益于体液循环,同时对肾脏头发和胡须等都有好处。但临床报告表明何首乌可能会带来肝毒性,引起研究者的注意,本研究旨在研究何首乌引起肝毒性的临床标志物和具体分子机制。

研究结果速读:

研究者利用不同萃取方法得到不同组分的何首乌萃取物(总提取物,水提取物,30%乙醇提取物,70乙醇提取物和二路甲烷提取物),通过对大鼠进行定时定量喂养不同的何首乌提取物,在喂养第90天进行血清/组织学检测和抗氧化指标检测来评判何首乌的肝毒性影响,同时进行iTRAQ定量蛋白质组学检测。

研究结论:

iTRAQ蛋白质组学研究发现,PM的肝毒性主要与氧化磷酸化途径有关。NADH脱氢酶家族蛋白和Slc16a2可能是由PM产生的肝毒性的潜在生物标志物。

服务项目:

iTRAQ定量蛋白质组学,WB分子验证。

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(图4)蛋白质组学生物信息分析


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(图5)WB与QPCR结果验证

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