靶向蛋白质组MRMHR/PRM定量简单介绍

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所属分类:基因组学

基因的产物——蛋白质,反应了生命活动正在发生的事情。蛋白质组成及含量变化的研究愈演愈烈。在蛋白质组学研究中,一方面,WB、ELISA这些依赖于抗体的检测方法,对抗体质量要求极高。另一方面,基因水平的表达与蛋白含量的变化相关性较差。这些传统的方法都给蛋白含量的分析带来了困难。在这个大时代背景之下,MRMHR /PRM堪称“质谱界的WB、定量金标准
、U盘中的‘数字化抗体’”便应运而生。

MRMHR/PRM简介
PRM(平行反应监测,
Parallel Reaction Monitoring),靶向蛋白质组,是一种基于高分辨、高精度质谱的靶向定量技术,能够对目标蛋白质/肽段(以及含有修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段的精准定量。借用听来的一个比喻来说,靶向蛋白质组扫描就像精准狙击,排除干扰,目标明确,每一枪直指目标。
其基本原理是:四级杆(Q)首先选出的目标肽段离子,进入碰撞室中打碎后,所有的碎片离子经过质量分析器产生一张高分辨的二级质谱图,通过提取其中的碎片离子信息即可实现目标肽段的定量。
 
 
MRMHR/PRM 
VS  WB

技术特点
(1)灵敏度、重现性和准确度高,定量范围可达到5个数量级,定量重现性CV 10%,
相对误差 15%。
(2)与经典的Westernblot、ELISA
技术相比,不需要使用抗体,获得更为准确和重现的定量验证结果。
(3)在一个小时检测时间内可同时实现50个蛋白质的定量检测。
(4)MRMHR/PRM可直接检测二级所有离子,减少了子离子的挑选和优化过程。
应用范围
目标蛋白质/肽段相对或绝对定量,蛋白质翻译后修饰的定性定量研究。
(1)定量蛋白质组学(iTRAQ、label-free、SILAC)后,目标蛋白需验证
(2)要做WB,却苦于没有抗体
(3)有多个蛋白质需同时定量
(4)功能研究中涉及到蛋白质定量
 
在应用时,一方面,使蛋白质验证不再受制于商业化抗体,可以应用于多种非模式生物。另一方面,使抗体验证能够高通量的在大规模生物样本上进行,提高实验效率。

技术特点
(1)灵敏度、重现性和准确度高,定量范围可达到5个数量级,定量重现性CV 10%,
相对误差 15%。
(2)与经典的Westernblot、ELISA
技术相比,不需要使用抗体,获得更为准确和重现的定量验证结果。
(3)在一个小时检测时间内可同时实现50个蛋白质的定量检测。
(4)MRMHR/PRM可直接检测二级所有离子,减少了子离子的挑选和优化过程。
应用范围
目标蛋白质/肽段相对或绝对定量,蛋白质翻译后修饰的定性定量研究。
(1)定量蛋白质组学(iTRAQ、label-free、SILAC)后,目标蛋白需验证
(2)要做WB,却苦于没有抗体
(3)有多个蛋白质需同时定量
(4)功能研究中涉及到蛋白质定量
 
在应用时,一方面,使蛋白质验证不再受制于商业化抗体,可以应用于多种非模式生物。另一方面,使抗体验证能够高通量的在大规模生物样本上进行,提高实验效率。
Reference:
Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate
markers for breast cancer. Proc Natl Acad Sci
 U S A 2017, 114(12): 3175-3180

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