小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察

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所属分类:生物信息学

实验目的

掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程,了解操作步骤的原理

实验原理

小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析。

实验原理

制备方法包括以下几个要点:

1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处

2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上

3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象

实验用品

1.材料:小白鼠

2.器具:注射器(1ml,5ml) 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的 离心管 离心机 载玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅

3.药品:0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1) 2%柠檬酸钠 改良石炭酸品红

实验步骤

预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察

1.预处理:实验前2.5-3小时,按每克体重注射0.02ml,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。

2.取股骨:断颈处死小鼠后,剔去肌肉组织,洗净

3.冲洗骨髓:剪去两端的股骨头,吸取 10ml 2%柠檬酸钠,注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨,洗液收集到10ml的 离心管中

4 .离心: 1000r/min 离心10 min ,弃上清

5 .低渗:加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃ 水浴 低渗30 min ,中间(约15 min )再吹散一次,使细胞分散,悬浮于溶液中

6.离心:1000r/min离心10 min,弃上清

7.固定:沉淀加8ml固定液,并用 吸管 轻 轻吹匀,进行固定,中间(约15 min )再吹散一次

实验步骤

8. 离心: 1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清,轻轻吹打成细胞悬液

9. 滴片:用 吸管 吸取细胞悬液,高度30-40 cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干

10. 染色:改良石炭酸品红染色10-20 min

11. 观察:低倍———高倍

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